Stim2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403491-ACT

STIM2 (stromal interaction molecule 2) codifica un sensore di Ca²⁺ del reticolo endoplasmatico che collega l’esaurimento delle riserve di calcio nel lume all’ingresso di calcio operato dalle riserve (store‑operated calcium entry, SOCE) attraverso l’attivazione dei canali ORAI nelle giunzioni tra RE e membrana plasmatica. Modulando i segnali di calcio citosolico, Stim2 influenza l’accoppiamento eccitazione–trascrizione, la segnalazione sinaptica e immunitaria e programmi trascrizionali calcio‑dipendenti, inclusi NFAT e altre vie sensibili allo stress. Nella specie umana, STIM2 è stato associato ad alterazioni dell’omeostasi del calcio in contesti neurodegenerativi e neuropsichiatrici ed è anche studiato in relazione all’attivazione delle cellule immunitarie e alla regolazione metabolica. Le sue proprietà di sensing basale, rispetto a STIM1, lo rendono un nodo utile per analizzare i set point e le dinamiche della segnalazione del calcio in modelli fisiologici e rilevanti per la malattia.

Stim2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STIM2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Stim2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STIM2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STIM2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Stim2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STIM2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Stim2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Stim2 nelle cellule tumorali con espressione di STIM2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.