Stim1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401311

Panoramica

STIM1 codifica per la stromal interaction molecule 1 (Stim1), un sensore del Ca2+ del reticolo endoplasmatico (RE) che avvia l’ingresso di calcio dipendente dalle riserve (store-operated calcium entry) accoppiando lo svuotamento di Ca2+ del RE all’attivazione dei canali ORAI nelle giunzioni tra RE e membrana plasmatica. Questo afflusso di Ca2+ regola la trascrizione dipendente da NFAT, il rimodellamento del citoscheletro, la secrezione e reti più ampie di segnalazione calcio-dipendente che controllano proliferazione e risposte allo stress. Le vie dipendenti da STIM1 sono centrali per l’attivazione delle cellule immunitarie e per altre funzioni cellulari, in cellule eccitabili e non eccitabili, collegando alterazioni dell’omeostasi del calcio a fenotipi immunologici e ad altra patofisiologia. Nella biologia delle malattie umane, la deregolazione della segnalazione di STIM1 è spesso studiata nel contesto di un ingresso anomalo di Ca2+ e dei programmi trascrizionali a valle che influenzano le decisioni sullo stato cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Stim1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STIM1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STIM1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STIM1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Stim1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STIM1 per lo studio della segnalazione di Stim1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni STIM1 critici per la funzione di Stim1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STIM1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Stim1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Stim1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STIM1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Stim1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Stim1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STIM1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STIM1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.