STAU1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402630-ACT

La STAU1 umana (Staufen1) è una proteina legante l’RNA a doppio filamento che regola l’espressione genica post-trascrizionale controllando il trasporto, la localizzazione, la traduzione e la degradazione dell’mRNA. È un fattore centrale nella degradazione dell’mRNA mediata da Staufen (SMD), coordinando le interazioni con complessi ribonucleoproteici per modulare la stabilità dei trascritti e l’output del proteoma. STAU1 collega inoltre il metabolismo dell’RNA alle risposte allo stress cellulare, all’organizzazione del citoscheletro e alla progressione del ciclo cellulare attraverso i suoi ruoli nella dinamica dei granuli di RNA e nel controllo traduttivo. Un’attività deregolata di STAU1 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi dell’RNA osservate in fenotipi legati al cancro e alla neurobiologia, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico per lo studio di reti di regolazione genica rilevanti per la malattia.

STAU1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STAU1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

STAU1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STAU1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STAU1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di STAU1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STAU1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da STAU1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via STAU1 nelle cellule tumorali con espressione di STAU1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.