Stat5b Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423179-ACT

Stat5b del topo (signal transducer and activator of transcription 5B) è un fattore di trascrizione responsivo a citochine e ormoni, attivato a valle delle chinasi JAK in seguito alla segnalazione di recettori quali quello dell’ormone della crescita e di molte interleuchine. Dopo la fosforilazione su tirosina, STAT5B dimerizza, trasloca nel nucleo e regola programmi genici che controllano proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e omeostasi metabolica, con ruoli di primo piano nello sviluppo e nella funzione delle cellule immunitarie. Stat5b si integra nel crosstalk della via JAK/STAT con la segnalazione PI3K–AKT e MAPK, modellando output trascrizionali dipendenti dal contesto. Un’attività di STAT5B deregolata è associata a fenotipi ematopoietici e immunitari aberranti ed è stata ampiamente studiata in modelli di infiammazione e di segnalazione oncogenica.

Stat5b Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Stat5b senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Stat5b Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Stat5b nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Stat5b, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Stat5b. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Stat5b nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Stat5b nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Stat5b nelle cellule tumorali con espressione di Stat5b silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.