SSTR1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403410

Panoramica

SSTR1 codifica il recettore della somatostatina 1, un GPCR accoppiato a Gi/o che lega la somatostatina attenuando l’attività dell’adenilil ciclasi, riducendo il cAMP intracellulare e modulando la conduttanza dei canali ionici. Attraverso la segnalazione mediata da GPCR, SSTR1 influenza le cascate associate a MAPK e PI3K e contribuisce, in modo dipendente dal contesto, alla regolazione dell’eccitabilità neuronale, della secrezione endocrina e del controllo del ciclo cellulare. L’attività del recettore modella la comunicazione neuroendocrina e le vie di rilascio ormonale, e alterazioni della segnalazione della somatostatina sono state studiate in disturbi caratterizzati da secrezione, proliferazione e neurotrasmissione deregolate. SSTR1 è quindi un bersaglio utile per analizzare le reti inibitorie dei GPCR e il cross-talk tra vie di segnalazione in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SSTR1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SSTR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SSTR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SSTR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SSTR1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SSTR1 per lo studio della segnalazione di SSTR1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SSTR1 critici per la funzione di SSTR1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SSTR1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SSTR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SSTR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SSTR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SSTR1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SSTR1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SSTR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SSTR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.