Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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SRm300 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403447
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SRm300 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SRm300, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SRm300 Antibody (C-9): sc-390315
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SRm300 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403447 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SRRM2 codifica SRm300, un grande cofattore dello splicing ricco in serina/arginina che si localizza negli speckles nucleari e supporta l’assemblaggio dello spliceosoma e il processamento del pre-mRNA. SRm300 contribuisce alle decisioni di splicing alternativo e coordina l’accoppiamento tra trascrizione e splicing, influenzando la maturazione dell’RNA, la competenza all’esportazione dell’mRNA e la diversità del proteoma. Attraverso questi ruoli, SRRM2 incide su vie legate alla regolazione del ciclo cellulare, alle risposte al danno al DNA e a programmi di espressione genica adattativi allo stress. La disregolazione delle reti di splicing dipendenti da SRRM2 è stata associata a un uso aberrante delle isoforme osservato in contesti di cancro e di malattie del neurosviluppo o neurodegenerative, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sul processamento dell’RNA.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SRm300 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SRRM2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SRRM2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SRRM2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SRm300.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SRRM2 per lo studio della segnalazione di SRm300, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SRRM2 critici per la funzione di SRm300
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SRRM2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SRm300 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SRm300 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SRRM2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SRm300 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SRm300 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SRRM2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SRRM2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.