SREBP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400094-ACT

SREBF1 codifica la sterol regulatory element-binding protein 1 (SREBP-1), un fattore di trascrizione ancorato alla membrana che viene attivato per via proteolitica per controllare l’omeostasi dei lipidi e del colesterolo. La SREBP-1 attiva coordina l’espressione di geni coinvolti nella lipogenesi de novo e nella desaturazione degli acidi grassi, integrando i segnali nutritivi e insulinici con il traffico dal RE al Golgi e con le risposte allo stress del RE. Questa via modella la biogenesi delle membrane e l’accumulo di energia ed è spesso riorganizzata nei disturbi metabolici e nell’infiammazione guidata dai lipidi. Alterazioni dell’attività di SREBF1/SREBP-1 sono state inoltre collegate alla riprogrammazione metabolica oncogenica e a cambiamenti nei programmi di differenziamento cellulare.

SREBP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SREBF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SREBP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SREBF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SREBF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SREBP-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SREBF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SREBP-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SREBP-1 nelle cellule tumorali con espressione di SREBF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.