SR-A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401898-ACT

MSR1 umano codifica il recettore scavenger di classe A (SR-A), un recettore di riconoscimento dei pattern espresso prevalentemente su macrofagi e altre cellule mieloidi, che lega lipoproteine modificate, cellule apoptotiche e diversi ligandi microbici. SR-A contribuisce al riconoscimento dell’immunità innata e alla rimozione fagocitica, modulando al contempo le reti di segnalazione infiammatoria, incluso il crosstalk con le vie dei recettori Toll-like e i programmi citochinici. Grazie al suo ruolo nell’assorbimento di LDL ossidate e di detriti cellulari, MSR1 è ampiamente studiato nel contesto della gestione dei lipidi, della biologia delle foam cells e della polarizzazione dei macrofagi. Un’attività e un’espressione dis-regolate di MSR1 sono state associate a condizioni infiammatorie croniche e a meccanismi di malattia cardiometabolica, offrendo un punto d’ingresso molecolare per analizzare la regolazione immunometabolica.

SR-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MSR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SR-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MSR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MSR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SR-A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MSR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SR-A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SR-A nelle cellule tumorali con espressione di MSR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.