SR-2C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400886

Panoramica

HTR2C codifica il recettore umano della serotonina 2C (SR-2C), un recettore accoppiato a proteine G che si accoppia principalmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, la produzione di inositolo trifosfato, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare e l’attivazione della protein chinasi C. SR-2C attiva inoltre le vie MAPK/ERK e modula l’eccitabilità neuronale e la trasmissione sinaptica attraverso effetti sull’attività dei canali ionici e sulla dinamica dei secondi messaggeri. Nel sistema nervoso centrale, HTR2C contribuisce alla regolazione dell’appetito, dell’umore, della risposta allo stress e delle funzioni endocrine, integrando gli input serotoninergici con programmi trascrizionali e metabolici a valle. La disregolazione della segnalazione 5-HT2C e il RNA editing/le varianti di splicing in HTR2C sono stati associati nella letteratura di ricerca a fenotipi neuropsichiatrici e metabolici, a supporto della sua utilità come bersaglio meccanicistico per studi su vie di segnalazione e relazioni genotipo–fenotipo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SR-2C (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HTR2C in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HTR2C insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HTR2C a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SR-2C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HTR2C per lo studio della segnalazione di SR-2C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HTR2C critici per la funzione di SR-2C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HTR2C per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SR-2C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SR-2C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HTR2C. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SR-2C Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SR-2C (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HTR2C per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HTR2C definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.