SQSTM1/p62 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400099-LAC

Il gene umano **SQSTM1** codifica la sequestosoma 1 (**SQSTM1/p62**), un recettore multifunzionale dell’autofagia e scaffold di segnalazione che collega i carichi ubiquitinati agli autofagosomi positivi per LC3 tramite i suoi motivi **UBA** e **LIR**. SQSTM1/p62 coordina l’autofagia selettiva, la proteostasi e le risposte allo stress, e modula vie chiave tra cui la segnalazione antiossidante **KEAP1–NRF2**, l’attivazione di **NF-κB** e la regolazione di **mTORC1** a livello del lisosoma. Grazie al suo ruolo nella rimozione degli aggregati proteici e nella segnalazione dell’immunità innata, un’attività alterata di SQSTM1/p62 è spesso studiata nel contesto della neurodegenerazione, della biologia del cancro e dei meccanismi delle malattie infiammatorie. SQSTM1/p62 contribuisce inoltre al controllo di qualità degli organelli e alla segnalazione al crocevia tra la degradazione dipendente dall’ubiquitina e i programmi trascrizionali.

Le particelle di attivazione lentivirale SQSTM1/p62 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SQSTM1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SQSTM1/p62 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SQSTM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SQSTM1/p62. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SQSTM1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.