SQSTM1/p62 Plasmide Double Nickase (m): sc-422075-NIC

Il gene murino *Sqstm1* codifica SQSTM1/p62, un adattatore multifunzionale che lega i carichi poliubiquitinati tramite il suo dominio UBA e li collega agli autofagosomi LC3-positivi attraverso un motivo LIR, coordinando l’autofagia selettiva e la proteostasi. SQSTM1/p62 funge inoltre da impalcatura per complessi di segnalazione nella risposta allo stress ossidativo KEAP1–NRF2 e nella segnalazione di NF-κB, integrando il sensing dei nutrienti e segnali infiammatori. In quanto hub inducibile dallo stress, un’alterata regolazione di SQSTM1/p62 influisce sul flusso autofagico, sulla rimozione degli aggregati e sul controllo di qualità mitocondriale, processi frequentemente analizzati in modelli di neurodegenerazione, disfunzione metabolica e biologia tumorale. I suoi ruoli nella segnalazione dell’ubiquitina e negli assemblaggi proteici separati di fase lo rendono un readout centrale negli studi sullo stress proteotossico e sulla segnalazione dell’immunità innata.

SQSTM1/p62 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sqstm1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sqstm1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sqstm1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sqstm1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.