Plásmido CRISPR de Activación (h) SPT16: sc-401268-ACT

El gen humano **SUPT16H** codifica **SPT16**, una subunidad central del complejo chaperón de histonas **FACT** (Facilitador de la Transcripción de la Cromatina), que reorganiza los nucleosomas para favorecer la elongación de la ARN polimerasa II. Al coordinar la dinámica de **H2A–H2B** y la accesibilidad de la cromatina, SPT16 ayuda a regular programas transcripcionales, la remodelación de la cromatina asociada a la replicación y las respuestas al daño del ADN. El control de la cromatina dependiente de FACT vincula a SUPT16H con redes de señalización proliferativa y vías de estabilidad genómica, lo que lo hace relevante para el estudio de la regulación epigenética y de los mecanismos que contribuyen a la transcripción oncogénica y a la adaptación al estrés. La actividad alterada de FACT se ha asociado con una expresión génica desregulada y con estados de cromatina anómalos observados en múltiples contextos relacionados con el cáncer, lo que respalda su uso como un nodo funcional en la investigación de cromatina y transcripción.

SPT16 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SUPT16H sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SPT16 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SUPT16H en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SUPT16H, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SPT16. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SUPT16H y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SPT16 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SPT16 en células tumorales con expresión de SUPT16H silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.