SPRN Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407259

Panoramica

SPRN codifica la shadow of prion protein (Shadoo), una proteina di membrana ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI), particolarmente abbondante nel sistema nervoso e implicata nella biologia correlata ai prioni. Shadoo condivide caratteristiche strutturali e funzionali con le proteine della famiglia PRNP ed è collegata a processi quali il controllo di qualità proteico, l’organizzazione dei microdomini di membrana e le risposte cellulari allo stress. Un’alterata espressione di SPRN è stata associata alla suscettibilità alle malattie da prioni e a fenotipi neurodegenerativi in modelli sperimentali, a supporto della sua rilevanza per le vie che regolano la proteostasi e la vitalità neuronale. Studiare SPRN aiuta a chiarire come le reti di proteine “prion-like” influenzino il mantenimento sinaptico e le risposte allo stress da proteine mal ripiegate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPRN (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPRN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPRN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPRN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPRN.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPRN per lo studio della segnalazione di SPRN, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPRN critici per la funzione di SPRN
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPRN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPRN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPRN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPRN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPRN Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPRN (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPRN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPRN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.