SPRED1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402981

Panoramica

SPRED1 (proteina 1 contenente il dominio EVH1 correlato a sprouty) è un regolatore negativo della segnalazione mediata dai recettori tirosina-chinasici, che limita la cascata Ras–RAF–MEK–ERK/MAPK accoppiandosi al complesso Ras-GAP della neurofibromina (NF1). Riducendo l’attivazione di ERK dipendente dai fattori di crescita, SPRED1 influenza proliferazione, differenziamento e migrazione cellulare in molteplici contesti tissutali. Varianti loss-of-function in SPRED1 sono associate alla sindrome di Legius e a caratteristiche di pigmentazione alterata e del neurosviluppo; inoltre, una ridotta attività di SPRED1 può influenzare l’ampiezza della via MAPK in reti di segnalazione rilevanti per il cancro. SPRED1 è quindi ampiamente studiata in modelli di biologia delle rasopatie, nei programmi trascrizionali guidati da ERK e nel controllo a feedback della segnalazione mitogena.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPRED1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPRED1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPRED1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPRED1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPRED1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPRED1 per lo studio della segnalazione di SPRED1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPRED1 critici per la funzione di SPRED1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPRED1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPRED1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPRED1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPRED1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPRED1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPRED1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPRED1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPRED1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.