SPPL2b Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405646

Panoramica

SPPL2B codifica SPPL2b, una proteasi aspartilica intramembrana della famiglia “signal peptide peptidase–like”, localizzata nelle membrane endosomiali e lisosomiali. SPPL2b contribuisce alla proteolisi intramembrana regolata, modulando il turnover delle proteine di membrana e la generazione di frammenti peptidici all’interno del sistema endo-lisosomiale. Attraverso queste attività, SPPL2b è in grado di influenzare il traffico vescicolare, la processazione dei recettori e la segnalazione a valle collegata a vie immunitarie e infiammatorie. La deregolazione della proteolisi intramembrana e della funzione endo-lisosomiale è rilevante negli studi sulla neurodegenerazione, sull’omeostasi delle cellule immunitarie e sul controllo qualità delle proteine di membrana.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPPL2b (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPPL2B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPPL2B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPPL2B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPPL2b.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPPL2B per lo studio della segnalazione di SPPL2b, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPPL2B critici per la funzione di SPPL2b
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPPL2B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPPL2b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPPL2b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPPL2B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPPL2b Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPPL2b (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPPL2B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPPL2B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.