SPNS2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-432145-LAC

Spns2 codifica SPNS2, un trasportatore di membrana multipasso che esporta la sfingosina-1-fosfato (S1P), un mediatore lipidico che stabilisce gradienti extracellulari di S1P e controlla il traffico delle cellule immunitarie, la maturazione vascolare e la funzione di barriera endoteliale. Regolando la disponibilità di S1P per la segnalazione mediata da S1PR1–S1PR5, SPNS2 influenza vie a valle tra cui PI3K–AKT, MAPK/ERK, il rimodellamento del citoscheletro guidato dalle Rho GTPasi e la chemiotassi mediata da GPCR. Nei modelli murini, alterazioni dell’attività di Spns2 sono state associate a cambiamenti nell’uscita dei linfociti, nelle risposte infiammatorie e in fenotipi vascolari, rendendolo rilevante per studi sull’omeostasi immunitaria e sulla segnalazione del microambiente tissutale. Questo gene è quindi ampiamente utilizzato in indagini meccanicistiche sulla segnalazione lipidica, sul crosstalk endotelio–sistema immunitario e su programmi di traffico cellulare responsivi allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale SPNS2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Spns2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SPNS2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Spns2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SPNS2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Spns2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.