SPNS2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405481-LAC

SPNS2 (spinster homolog 2) codifica un trasportatore di membrana multipasso che esporta la sfingosina-1-fosfato (S1P), un mediatore lipidico bioattivo che modella i gradienti extracellulari di S1P e la segnalazione attraverso i recettori S1PR. Controllando la disponibilità di S1P, SPNS2 influenza processi tra cui il traffico delle cellule immunitarie, la biologia vascolare ed endoteliale e la funzione di barriera, intersecando il metabolismo degli sfingolipidi e vie guidate da GPCR come la segnalazione PI3K–AKT e MAPK. Un’alterata attività di SPNS2 può perturbare l’omeostasi della S1P ed è stata associata a fenotipi infiammatori e a risposte immunitarie disregolate in contesti rilevanti per la malattia. Di conseguenza, SPNS2 è spesso studiato per analizzare la regolazione dei trasportatori lipidici e la comunicazione dipendente da S1P tra i tessuti e le cellule immunitarie circolanti.

Le particelle di attivazione lentivirale SPNS2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SPNS2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SPNS2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SPNS2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SPNS2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SPNS2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.