Plasmide CRISPR d'Activation (h) spectrin α II: sc-400910-ACT

SPTAN1 code la spectrine α II humaine, un composant central du squelette membranaire spectrine–actine, qui soutient l’intégrité de la membrane plasmique et organise l’architecture du cytosquelette cortical. La spectrine α II forme des hétérotétramères avec les β-spectrines afin d’échafauder des canaux ioniques et des complexes de signalisation, contribuant à des processus tels que l’adhésion cellulaire, la mécanotransduction et le maintien de la polarité cellulaire. Grâce à ses fonctions structurales et d’adaptation, SPTAN1 influence des voies dépendantes du cytosquelette, notamment le trafic membranaire, la stabilité des jonctions et la migration cellulaire. La dérégulation des réseaux de spectrine a été associée à une altération de l’homéostasie neuronale et épithéliale et s’avère pertinente pour l’étude des troubles du cytosquelette et des perturbations de signalisation liées à des phénotypes pathologiques.

spectrin α II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SPTAN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

spectrin α II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SPTAN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SPTAN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de spectrin α II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SPTAN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de spectrin α II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie spectrin α II dans les cellules tumorales présentant une expression de SPTAN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.