SPATA2 Plasmide Double Nickase (m): sc-435216-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SPATA2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SPATA2 Double Nickase Plasmid (m) e il SPATA2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Spata2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SPATA2 Antibody (EE-31): sc-100946
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SPATA2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-435216-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SPATA2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-435216-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Spata2** codifica **SPATA2**, una proteina adattatrice citoplasmatica che coordina la segnalazione dipendente dall’ubiquitina e regola vie infiammatorie e di risposta allo stress. SPATA2 si associa al complesso della deubiquitinasi **CYLD** ed è stata collegata alla modulazione della segnalazione **NF-κB** e **MAPK** a valle di segnali mediati da recettori, influenzando la sopravvivenza cellulare, l’apoptosi e gli output dell’immunità innata. Sebbene inizialmente caratterizzata nel contesto della spermatogenesi, SPATA2 è ampiamente rilevante per l’omeostasi cellulare e la proteostasi attraverso il controllo dell’editing delle catene di ubiquitina. La disregolazione dei componenti dell’asse SPATA2–CYLD è spesso studiata in modelli di infiammazione, disfunzione della barriera epiteliale e segnalazione associata ai tumori, senza implicare esiti clinici.
SPATA2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Spata2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Spata2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Spata2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Spata2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.