Spartin Plasmide Double Nickase (h): sc-407769-NIC

SPG20 codifica la Spartina, una proteina citosolica implicata nel traffico endosomiale e nella dinamica delle membrane attraverso interazioni con componenti del macchinario ESCRT e con vie di smistamento dipendenti dall’ubiquitina. La Spartina è stata collegata alla regolazione del turnover delle goccioline lipidiche e dell’omeostasi mitocondriale, integrandosi con processi cellulari di controllo qualità che influenzano la proteostasi e la funzione degli organelli. L’alterazione di SPG20 è associata alla sindrome di Troyer, una paraplegia spastica ereditaria complicata caratterizzata dal coinvolgimento dello sviluppo neurologico e del sistema motorio, rendendo la Spartina un nodo utile per studiare meccanismi di traffico e di risposta allo stress rilevanti per i neuroni. Nei modelli cellulari, la perturbazione di SPG20 può essere impiegata per analizzare come modifiche nell’instradamento endo-lisosomiale e nella manutenzione degli organelli influenzino la segnalazione e la vitalità cellulare.

Spartin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SPG20 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SPG20. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SPG20. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SPG20 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.