SP-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422901

Panoramica

Sftpb codifica la proteina B del surfattante (SP-B), una proteina idrofobica secreta essenziale per l’assemblaggio e la funzione del surfattante polmonare nelle cellule epiteliali alveolari di tipo II. SP-B favorisce l’adsorbimento dei fosfolipidi e la stabilità del film all’interfaccia aria–liquido, sostenendo la compliance alveolare e un’efficiente funzione di scambio gassoso. La sua maturazione e il suo traffico sono strettamente legati alla biogenesi dei corpi lamellari e a vie secretorie regolamentate; l’alterazione di SP-B perturba l’omeostasi del surfattante e le risposte di stress cellulare nel polmone distale. La modifica dell’espressione o della funzione di Sftpb è ampiamente utilizzata come strumento molecolare per studiare i meccanismi della disfunzione del surfattante e i fenotipi di danno polmonare in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SP-B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sftpb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sftpb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sftpb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SP-B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sftpb per lo studio della segnalazione di SP-B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sftpb critici per la funzione di SP-B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sftpb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SP-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SP-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sftpb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SP-B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SP-B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sftpb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sftpb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.