Sox-5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401854-ACT

SOX5 codifica il fattore di trascrizione Sox-5, un membro della famiglia SOX che si lega al DNA tramite un dominio HMG box e coordina programmi di espressione genica specifici di linea durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. Nelle cellule umane, Sox-5 contribuisce alla regolazione della condrogenesi e della neurogenesi modulando l’attività degli enhancer e cooperando con altri regolatori trascrizionali per modellare differenziamento, proliferazione e decisioni sul destino cellulare. Le reti trascrizionali associate a SOX5 intersecano vie che controllano l’organizzazione della matrice extracellulare e la maturazione neuronale, collegando la sua attività a processi che influenzano l’architettura dei tessuti e la formazione dei circuiti. Un’espressione o una funzione disregolata di SOX5 è stata implicata in disturbi dello sviluppo e nel rimodellamento trascrizionale associato al cancro, sostenendone il valore come nodo per lo studio delle relazioni genotipo-fenotipo.

Sox-5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox-5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox-5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox-5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox-5 nelle cellule tumorali con espressione di SOX5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.