Sox-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403896

Panoramica

SOX3 codifica Sox-3, un fattore di trascrizione con dominio HMG-box che si lega al DNA e modella programmi di espressione genica dipendenti dalla cromatina, essenziali per la specificazione precoce del neuroectoderma e per il mantenimento dell’identità dei progenitori neurali. Sox-3 agisce all’interno di reti regolatorie fondamentali dello sviluppo insieme ad altri fattori della famiglia SOX, influenzando le vie che governano le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione nel sistema nervoso centrale e nell’asse ipofisario in sviluppo. Alterazioni del dosaggio di SOX3 o perturbazioni della sua regolazione sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e a disturbi dello sviluppo ipotalamo–ipofisario, evidenziandone la rilevanza per lo studio del controllo trascrizionale durante lo sviluppo umano. In ambito di ricerca, SOX3 viene spesso analizzato per il suo ruolo nell’impegno di linea, nei modelli di differenziazione neurale e nell’architettura delle reti di fattori di trascrizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sox-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SOX3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SOX3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SOX3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sox-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SOX3 per lo studio della segnalazione di Sox-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SOX3 critici per la funzione di Sox-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SOX3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sox-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Sox-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SOX3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sox-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Sox-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SOX3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SOX3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.