Sos 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402199-ACT

Il gene umano **SOS2** codifica **Son of Sevenless homolog 2 (Sos2)**, un fattore di scambio di nucleotidi della guanina (GEF) per Ras che collega le tirosin-chinasi recettoriali attivate alla segnalazione **RAS-MAPK**. Sos2 promuove lo scambio da **GDP a GTP** su RAS, influenzando l’output della via **ERK**, i programmi trascrizionali, la proliferazione, la differenziazione e la segnalazione di risposta allo stress a valle di complessi adattatori come **GRB2**. Attraverso il coordinamento con regolatori paralleli di RAS, SOS2 contribuisce alla dinamica della via e all’ampiezza del segnale che modellano le decisioni sul destino cellulare. La deregolazione della segnalazione RAS-MAPK è una caratteristica comune della trasformazione oncogenica e di disturbi dello sviluppo, rendendo SOS2 un nodo utile per studi meccanicistici sul ricollegamento delle vie di segnalazione e sulla segnalazione compensatoria.

Sos 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOS2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sos 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOS2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOS2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sos 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOS2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sos 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sos 2 nelle cellule tumorali con espressione di SOS2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.