Plasmide CRISPR d'Activation (h) Somatostatin: sc-400280-ACT

Le gène humain **SST** code la somatostatine, une hormone peptidique largement exprimée dans le système nerveux et les tissus endocriniens, qui inhibe la sécrétion de l’hormone de croissance, de l’insuline, du glucagon et de multiples hormones gastro-intestinales. La somatostatine transmet ses signaux principalement via les récepteurs de la somatostatine couplés aux protéines G (SSTR1–SSTR5), en mobilisant une inhibition de l’adénylate cyclase médiée par Gi/o, une modulation des canaux ioniques, ainsi qu’une régulation en aval des voies MAPK et PI3K afin d’ajuster l’excitabilité, la sécrétion et la prolifération cellulaire. Dans les contextes neuroendocriniens et pancréatiques, **SST** contribue au contrôle paracrine de la libération des hormones des îlots et à une signalisation neuroendocrinienne sensible au stress. Une signalisation de la somatostatine dérégulée est pertinente pour l’étude de l’homéostasie métabolique, de la différenciation neuroendocrinienne et de la biologie des maladies hormonodépendantes, notamment dans des modèles de dysfonction des îlots pancréatiques et de phénotypes de tumeurs neuroendocrines.

Somatostatin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SST sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Somatostatin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SST dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SST, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Somatostatin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SST natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Somatostatin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Somatostatin dans les cellules tumorales présentant une expression de SST silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.