SOAT2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-409713-LAC

SOAT2 (sterol O-acyltransferase 2; ACAT2) è un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza la formazione di esteri del colesterolo a partire da colesterolo e acil-CoA di acidi grassi a lunga catena, supportando l’immagazzinamento intracellulare del colesterolo e l’assemblaggio delle lipoproteine. È particolarmente abbondante negli epatociti e negli enterociti intestinali, dove contribuisce all’assorbimento dei lipidi, alla secrezione di VLDL e, più in generale, all’omeostasi degli steroli. L’attività di SOAT2 si interfaccia con i programmi del metabolismo lipidico guidati da SREBP, con il rimodellamento lipidico del RE e con le risposte cellulari al sovraccarico di steroli, che possono influenzare la biologia delle cellule schiumose (foam cells) e la segnalazione infiammatoria. Un metabolismo degli esteri del colesterolo deregolato che coinvolge SOAT2 è rilevante per i meccanismi delle malattie metaboliche e per patologie associate ai lipidi, studiate in modelli di ricerca su aterosclerosi, fegato grasso e dislipidemia.

Le particelle di attivazione lentivirale SOAT2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SOAT2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SOAT2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SOAT2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SOAT2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SOAT2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.