SOAT2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409713-ACT

SOAT2 umano (sterol O-aciltransferasi 2), noto anche come ACAT2, è un enzima localizzato nel reticolo endoplasmatico che catalizza l’esterificazione del colesterolo con acil‑CoA di acidi grassi a lunga catena per formare esteri del colesterolo. Questa reazione sostiene l’immagazzinamento intracellulare del colesterolo, la biogenesi delle goccioline lipidiche e l’assemblaggio delle lipoproteine, collegando l’attività di SOAT2 all’omeostasi degli steroli e a reti più ampie del metabolismo lipidico. SOAT2 agisce all’interfaccia tra il traffico del colesterolo, l’assorbimento intestinale e la gestione epatica dei lipidi, influenzando vie che regolano la composizione di membrana e il tamponamento dei lipidi neutri. Un metabolismo degli esteri del colesterolo deregolato e un’espressione alterata di SOAT2 sono stati associati a fenotipi rilevanti per malattie metaboliche e cardiovascolari, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sullo stress cellulare e sul rimodellamento guidati dai lipidi.

SOAT2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOAT2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SOAT2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOAT2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOAT2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SOAT2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOAT2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SOAT2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SOAT2 nelle cellule tumorali con espressione di SOAT2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.