SNX27 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403237-ACT

SNX27（sorting nexin 27）はPXドメインを有するエンドソームアダプターで、膜リン脂質（ホスホイノシチド）の認識を貨物（カーゴ）のリサイクリングと結び付けます。主に、PDZドメインが膜貫通タンパク質上のPDZ結合モチーフと相互作用することでこの働きを担います。SNX27はレトロマーおよびWASH複合体と会合することで、エンドソームから細胞膜への輸送と、アクチン依存的なチューブ形成を協調的に制御し、受容体の利用可能性や下流シグナル伝達を形作ります。これらの過程は、シナプス受容体の恒常性、栄養トランスポーターのリサイクル、上皮の極性維持に影響し、細胞シグナルの強度や膜プロテオスタシスを制御する経路とSNX27を結び付けます。SNX27の発現や機能の変化は、神経発達性および神経変性の表現型、ならびに複数の疾患関連の細胞状況で観察される受容体輸送異常に関与することが示唆されています。

SNX27 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SNX27の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SNX27 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SNX27 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSNX27転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SNX27の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSNX27遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSNX27依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSNX27発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSNX27経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。