SNAT1 Plasmide Double Nickase (m): sc-430613-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SNAT1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SNAT1 Double Nickase Plasmid (m) e il SNAT1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc38a1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SNAT1 Antibody (H-9): sc-137032
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SNAT1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430613-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc38a1 codifica il trasportatore di aminoacidi neutri accoppiato al sodio SNAT1 (sistema A), una delle principali vie di ingresso cellulare per glutamina, alanina, serina e substrati correlati nei tessuti murini. Regolando i pool intracellulari di aminoacidi, SNAT1 influenza il sensing dei nutrienti e l’omeostasi metabolica, incluse vie associate alla segnalazione mTORC1, all’equilibrio redox e alla disponibilità di precursori dei neurotrasmettitori. Nel sistema nervoso, SNAT1 contribuisce alla gestione della glutamina che sostiene la neurotrasmissione glutamatergica e GABAergica e il metabolismo sinaptico complessivo. Alterazioni del trasporto di aminoacidi e della dipendenza dalla glutamina sono implicate in processi di neurosviluppo e neurodegenerazione, oltre che nel rimodellamento metabolico, rendendo Slc38a1 un nodo utile per studi meccanicistici dei fenotipi cellulari guidati dai nutrienti.
SNAT1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc38a1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc38a1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc38a1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc38a1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.