SNAT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430613

Panoramica

Slc38a1 codifica il trasportatore 1 di amminoacidi neutri accoppiato al sodio (SNAT1), un trasportatore del sistema A che media l’assorbimento, dipendente da Na⁺, di piccoli amminoacidi neutri come glutammina, alanina e serina attraverso la membrana plasmatica. Regolando la disponibilità intracellulare di amminoacidi, SNAT1 contribuisce all’equilibrio dell’azoto cellulare, all’omeostasi redox e a programmi di segnalazione metabolica, inclusa la regolazione di mTORC1 sensibile agli amminoacidi. Nei tessuti murini, l’attività di SNAT1 è particolarmente rilevante per la gestione degli amminoacidi in neuroni e cellule gliali, che sostiene il ciclo dei neurotrasmettitori e le richieste bioenergetiche. Alterazioni nel trasporto di amminoacidi neutri sono state associate a risposte allo stress metabolico e a fenotipi legati alla neurobiologia, rendendo Slc38a1 un bersaglio utile per studiare il trasporto dei nutrienti e il crosstalk della segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SNAT1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc38a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc38a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc38a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SNAT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc38a1 per lo studio della segnalazione di SNAT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc38a1 critici per la funzione di SNAT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc38a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SNAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SNAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc38a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SNAT1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SNAT1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc38a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc38a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.