Smurf2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425947

Panoramica

Smurf2 (ligasi E3 dell’ubiquitina 2 specifica per SMAD) è una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo HECT che regola il turnover proteico e l’intensità del segnale in molteplici vie, tra cui la segnalazione TGF-β/BMP e Wnt. Ubiquitinando substrati come gli SMAD regolati dal recettore e componenti di segnalazione associati, Smurf2 contribuisce a controllare programmi trascrizionali che governano proliferazione, differenziamento e plasticità epitelio–mesenchimale. Smurf2 contribuisce anche alla stabilità del genoma e alle risposte cellulari allo stress modulando proteine associate al danno al DNA e ai checkpoint. Un’attività di Smurf2 deregolata è stata collegata ad alterazioni dell’omeostasi tissutale e a fenotipi rilevanti per il cancro, inclusi cambiamenti nel controllo della crescita, nella segnalazione associata alla fibrosi e in tratti metastatici, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Smurf2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Smurf2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Smurf2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Smurf2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Smurf2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Smurf2 per lo studio della segnalazione di Smurf2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Smurf2 critici per la funzione di Smurf2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Smurf2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Smurf2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Smurf2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Smurf2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Smurf2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Smurf2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Smurf2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Smurf2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.