Plásmido CRISPR de Activación (h) SMG1: sc-404760-ACT

SMG1 codifica una quinasa de serina/treonina relacionada con PI3K que actúa como componente central de la vía de degradación de ARNm mediada por codones sin sentido (NMD), al fosforilar UPF1 y coordinar la vigilancia de transcritos que contienen codones de terminación prematuros. Mediante la regulación de la estabilidad y la traducción del ARNm, SMG1 contribuye a la proteostasis, a las respuestas celulares al estrés y a programas de integridad genómica que se entrecruzan con la señalización del daño en el ADN y el control del ciclo celular. La alteración de la NMD dependiente de SMG1 puede reconfigurar el control de calidad del transcriptoma, influyendo en estados de diferenciación y en redes de expresión génica adaptativas al estrés. La actividad desregulada de SMG1 se ha vinculado con cambios en la vigilancia del ARN y en fenotipos de señalización observados en múltiples contextos patológicos, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar el metabolismo del ARN y las vías relacionadas con el estrés.

SMG1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SMG1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SMG1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SMG1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SMG1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SMG1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SMG1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SMG1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SMG1 en células tumorales con expresión de SMG1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.