Smad6 Plasmide Double Nickase (h): sc-401411-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Smad6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Smad6 Double Nickase Plasmid (h) e il Smad6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SMAD6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Smad6 Antibody (D-4): sc-25321
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Smad6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401411-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Smad6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401411-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD6 codifica Smad6, uno SMAD inibitorio che antagonizza la segnalazione della superfamiglia BMP e TGF-β interferendo con la fosforilazione degli SMAD regolati dal recettore e con la successiva formazione dei complessi trascrizionali a valle. Attenuando i programmi dipendenti da BMP, Smad6 contribuisce al controllo della differenziazione osteogenica, della morfogenesi vascolare e cardiaca e alla regolazione, dipendente dal contesto, delle risposte infiammatorie e della matrice extracellulare. Un’attività alterata di SMAD6 è stata associata in letteratura a fenotipi cardiovascolari e craniofacciali congeniti e a processi di rimodellamento tissutale deregolati in cui l’equilibrio BMP/TGF-β è cruciale. In quanto regolatore a feedback negativo, SMAD6 è spesso studiato per definire le soglie di attivazione della via, la durata del segnale e il cross-talk con MAPK e con il turnover mediato dall’ubiquitina dei componenti della segnalazione.
Smad6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMAD6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMAD6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMAD6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMAD6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.