Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Smad2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421525
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Smad2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Smad2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Smad2 Antibody (YZ-13): sc-101153
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Smad2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421525 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Smad2 codifica un trasduttore di segnale intracellulare nella via canonica TGF-β/Activin/Nodal, agendo come R-SMAD che viene fosforilato al C-terminale dai recettori di tipo I e forma complessi trascrizionali con SMAD4. Nelle cellule murine, SMAD2 regola programmi genici che controllano il patterning embrionale, le decisioni di destino delle cellule staminali, la transizione epitelio-mesenchimale, il rimodellamento della matrice extracellulare e la modulazione immunitaria. Attraverso una regolazione trascrizionale dipendente dal contesto, SMAD2 influenza proliferazione, differenziamento e apoptosi, integrando segnali provenienti dai ligandi della superfamiglia del TGF-β con altre reti di segnalazione. Un’alterazione della segnalazione di SMAD2 è stata implicata in processi legati alla fibrosi, fenotipi infiammatori e biologia tumorale, tramite una modifica dell’output della via e dell’espressione dei geni bersaglio.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Smad2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Smad2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Smad2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Smad2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Smad2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Smad2 per lo studio della segnalazione di Smad2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Smad2 critici per la funzione di Smad2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Smad2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Smad2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Smad2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Smad2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Smad2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Smad2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Smad2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Smad2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.