Smad1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400182-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Smad1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Smad1 Double Nickase Plasmid (h) e il Smad1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SMAD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Smad1 Antibody (913C1b): sc-81378
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Smad1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400182-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Smad1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400182-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD1 codifica Smad1, uno SMAD regolato dal recettore che trasduce i segnali delle proteine morfogenetiche dell’osso (BMP) dai recettori serina/treonina chinasi attivati al nucleo. Dopo fosforilazione, Smad1 forma complessi con SMAD4 per regolare programmi trascrizionali che controllano la patterning embrionale, la differenziazione osteogenica e condrogenica e, più in generale, le decisioni sul destino cellulare. L’attività di Smad1 è modulata dal crosstalk tra vie di segnalazione, inclusi MAPK e il turnover mediato dall’ubiquitina, che ne determina ampiezza e durata del segnale. Un’alterazione della segnalazione BMP/SMAD1 è stata implicata in anomalie dello sviluppo e in stati di differenziazione aberranti rilevanti per la biologia del cancro e il rimodellamento tissutale.
Smad1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMAD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMAD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMAD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMAD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.