Sm D3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405302

Panoramica

SNRPD3 codifica la proteina core Sm D3, un componente conservato dell’anello Sm che si assembla sulle snRNA per formare le piccole ribonucleoproteine nucleari spliceosomiali (snRNP). Sm D3 supporta la biogenesi delle snRNP e la fedeltà dello splicing del pre-mRNA, collegandola alla dinamica di assemblaggio dello spliceosoma e al controllo qualità della processazione dell’RNA. La perturbazione delle proteine core Sm può modificare l’utilizzo delle isoforme trascrittomiche e influenzare i programmi di espressione genica che regolano la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la differenziazione. Poiché lo splicing aberrante è una caratteristica comune di molti stati patologici, SNRPD3 viene spesso studiato come nodo di collegamento tra l’integrità dello spliceosoma e i fenotipi di maturazione dell’RNA su scala genomica nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sm D3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SNRPD3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SNRPD3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SNRPD3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sm D3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SNRPD3 per lo studio della segnalazione di Sm D3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SNRPD3 critici per la funzione di Sm D3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SNRPD3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sm D3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Sm D3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SNRPD3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sm D3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Sm D3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SNRPD3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SNRPD3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.