Sm B/B′ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404311-ACT

SNRPB codifica la proteina spliceosomiale core Sm B/B′, un componente canonico dell’anello Sm che si assembla su piccoli RNA nucleari ricchi di uridina per formare le snRNP U1, U2, U4/U6 e U5. Attraverso questi complessi, Sm B/B′ supporta lo splicing del pre‑mRNA, la biogenesi dello spliceosoma e programmi più ampi di processamento dell’RNA che modellano la diversità delle isoforme dei trascritti e l’omeostasi dell’espressione genica. La perturbazione della fedeltà di splicing associata a SNRPB può influenzare vie che regolano il controllo del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e output trascrizionali adattativi allo stress. Componenti dello spliceosoma deregolati, incluse le proteine Sm, sono spesso studiati in contesti di firme di splicing aberranti e di squilibri della proteostasi osservati in molteplici modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Sm B/B′ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNRPB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sm B/B′ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNRPB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNRPB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sm B/B′. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNRPB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sm B/B′ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sm B/B′ nelle cellule tumorali con espressione di SNRPB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.