Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Ska2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405933
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ska2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Ska2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ska2 Antibody (H-2): sc-514495
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ska2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405933 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SKA2 codifica la subunità 2 del complesso associato a fuso mitotico e cinetocoro (Ska2), componente centrale del complesso SKA che coopera con il complesso NDC80 per stabilizzare gli agganci cinetocoro–microtubulo durante la mitosi. Ska2 sostiene l’allineamento dei cromosomi (congression) e l’avvio dell’anafase promuovendo un legame persistente “end-on” dei microtubuli e contribuendo al silenziamento del checkpoint del fuso. Attraverso il suo ruolo nella progressione mitotica, SKA2 influenza la dinamica del ciclo cellulare, la fedeltà della segregazione cromosomica e la stabilità genomica. Un’espressione o una funzione deregolata di SKA2 è stata associata a fenotipi proliferativi e a instabilità cromosomica osservate in molteplici contesti patologici, rendendolo rilevante per studi meccanicistici delle risposte allo stress legate alla divisione cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ska2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SKA2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SKA2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SKA2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ska2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SKA2 per lo studio della segnalazione di Ska2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SKA2 critici per la funzione di Ska2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SKA2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Ska2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ska2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SKA2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Ska2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ska2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SKA2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SKA2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.