Ska1 Plasmide Double Nickase (h): sc-415109-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ska1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ska1 Double Nickase Plasmid (h) e il Ska1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SKA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ska1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-415109-NIC | 20 µg | $410.00 |
SKA1 codifica la subunità 1 del complesso associato al fuso e al cinetocoro (Ska1), un componente centrale del complesso SKA che collega gli attacchi end-on tra cinetocoro e microtubuli ai microtubuli del fuso in depolimerizzazione durante la mitosi. Ska1 favorisce un allineamento stabile dei cromosomi, lo spegnimento del checkpoint del fuso e l’avvio tempestivo dell’anafase, mantenendo così l’integrità del genoma grazie a una corretta segregazione cromosomica. L’alterazione della funzione del complesso SKA può promuovere instabilità cromosomica e aneuploidia, processi spesso studiati nel contesto di patologie proliferative e dell’evoluzione delle cellule tumorali. Di conseguenza, SKA1 è ampiamente utilizzato come punto di ingresso molecolare per indagare la dinamica del cinetocoro, il controllo del checkpoint mitotico e la progressione del ciclo cellulare nelle cellule umane.
Ska1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SKA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SKA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SKA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SKA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.