SIRT5 Plasmide Double Nickase (h): sc-416994-NIC

SIRT5 codifica una deacilasi sirtuin mitocondriale NAD+-dipendente che rimuove preferenzialmente le modificazioni lisiniche succinil, malonil e glutaril, modulando così l’attività enzimatica nel metabolismo centrale. Regolando vie quali il ciclo dell’urea, l’ossidazione degli acidi grassi e la fosforilazione ossidativa, SIRT5 contribuisce a mantenere l’omeostasi mitocondriale e l’equilibrio redox in presenza di fluttuazioni di nutrienti e di stress. Alterazioni dell’attività di SIRT5 sono state associate al rimodellamento metabolico, alle risposte allo stress ossidativo e alla disfunzione mitocondriale osservati in ambiti di ricerca oncologica e cardiometabolica. In quanto regolatore post-traduzionale delle proteine mitocondriali, SIRT5 è spesso studiata per il suo impatto sugli stati di acilazione del proteoma e sulle reti di segnalazione a valle che collegano lo stato energetico all’adattamento cellulare.

SIRT5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SIRT5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SIRT5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SIRT5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SIRT5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.