SIRT1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-430046-LAC

Il gene murino Sirt1 codifica la deacetilasi NAD⁺-dipendente SIRT1, un regolatore associato alla cromatina che collega lo stato energetico cellulare a programmi trascrizionali ed epigenetici. SIRT1 modula le risposte allo stress, la biogenesi mitocondriale e l’adattamento metabolico deacetilando bersagli quali p53, i fattori di trascrizione FOXO, NF-κB e PGC-1α, influenzando i pathway di apoptosi, infiammazione e stress ossidativo. Attraverso il crosstalk con la segnalazione AMPK–mTOR, la regolazione circadiana e le reti di riparazione del danno al DNA, SIRT1 orienta le decisioni sul destino cellulare in molteplici tessuti. Un’attività e un’espressione deregolate di SIRT1 sono state collegate a disfunzioni metaboliche, fenotipi di stress rilevanti per la neurodegenerazione, processi associati all’invecchiamento e contesti della biologia tumorale, a supporto del suo studio in diversi sistemi di modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale SIRT1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Sirt1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SIRT1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Sirt1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SIRT1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Sirt1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.