Plásmido CRISPR de Activación (h) SIP1/ZEB2: sc-400655-ACT

ZEB2, también conocido como SIP1, es un factor de transcripción con dedos de zinc que se une a secuencias E-box y regula la transición epitelio-mesenquimal (EMT) al reprimir programas génicos epiteliales, incluido CDH1, y coordinar el destino celular y la diferenciación. A través de sus interacciones con proteínas SMAD, SIP1/ZEB2 integra la señalización de TGF-β/BMP con la remodelación de la cromatina para controlar la especificación de linaje, la migración y el patrón del desarrollo. La actividad de ZEB2 determina el desarrollo de la cresta neural y el hematopoyético, y modula la diferenciación de células inmunitarias, vinculándolo con vías que gobiernan la morfogénesis tisular y las respuestas inflamatorias. La desregulación de redes transcripcionales asociadas a ZEB2 se ha implicado en trastornos del desarrollo y en programas de plasticidad celular relevantes para la progresión tumoral y fenotipos asociados a la metástasis.

SIP1/ZEB2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZEB2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SIP1/ZEB2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZEB2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZEB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SIP1/ZEB2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZEB2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SIP1/ZEB2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SIP1/ZEB2 en células tumorales con expresión de ZEB2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.