Sil Plasmide Double Nickase (h): sc-409193-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sil Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Sil Double Nickase Plasmid (h) e il Sil Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira STIL. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sil Antibody (A-6): sc-271910
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sil Plasmide Double Nickase (h) | sc-409193-NIC | 20 µg | $410.00 |
STIL (SCL/TAL1 interrupting locus), noto anche come Sil, codifica una proteina centrosomiale necessaria per la biogenesi dei centrioli e la corretta formazione del fuso mitotico. Agisce nell’asse PLK4–STIL–SAS-6 per avviare la formazione del procentriolo, supportando un’accurata segregazione dei cromosomi e la progressione del ciclo cellulare. Attraverso i suoi ruoli nella duplicazione del centrosoma e nei processi di neurosviluppo, un’alterata attività di STIL è associata ad amplificazione dei centrosomi, deregolazione proliferativa e disturbi dello sviluppo come la microcefalia primaria. Queste caratteristiche rendono STIL un bersaglio ampiamente utilizzato per lo studio dell’omeostasi del centrosoma, della fedeltà mitotica e delle relazioni genotipo-fenotipo nelle cellule umane proliferanti.
Sil Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus STIL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di STIL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di STIL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con STIL interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.