SIK2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406982-LAC

SIK2 (salt-inducible kinase 2) è una chinasi serina/treonina della famiglia delle chinasi correlate ad AMPK, che integra segnali metabolici e di stress per coordinare programmi trascrizionali e del citoscheletro. Modula la segnalazione CREB/CRTC attraverso un controllo dipendente dalla fosforilazione dei coattivatori CRTC, collegando la segnalazione mediata da cAMP all’espressione genica in processi quali il metabolismo di glucosio e lipidi, la funzione degli adipociti e la progressione del ciclo cellulare. SIK2 è stata inoltre implicata nella regolazione del centrosoma e nel controllo della mitosi, mettendo in relazione la segnalazione chinasica con la proliferazione e la fitness cellulare. Un’attività e un’espressione deregolate di SIK2 sono state associate ad alterazioni dell’omeostasi metabolica e a stati di segnalazione legati ai tumori, rendendola un nodo utile per studiare la regolazione guidata dalle chinasi in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale SIK2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SIK2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SIK2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SIK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SIK2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SIK2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.