Siglec-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402497-ACT

SIGLEC1 codifica Siglec-1 (CD169), una lectina di tipo immunoglobulinico legante l’acido sialico espressa selettivamente sui macrofagi e su specifiche popolazioni di cellule dendritiche, che media il riconoscimento e la cattura di glicoconiugati sialilati su cellule dell’ospite e patogeni. Grazie al suo ruolo nell’adesione, nell’endocitosi e nella gestione degli antigeni, Siglec-1 contribuisce al rilevamento dell’immunità innata, alle interazioni cellula-cellula e alla modulazione delle risposte infiammatorie nei microambienti tissutali. È comunemente associata a programmi di attivazione guidati dall’interferone di tipo I e a stati di polarizzazione dei macrofagi, rendendola un marcatore utile e un nodo funzionale nella biologia immunitaria mieloide. Un’espressione deregolata di SIGLEC1 è stata associata a condizioni infiammatorie croniche e autoimmuni, a processi di malattie infettive e a fenotipi di macrofagi associati al tumore, a sostegno della sua rilevanza per l’immunologia e la ricerca sui meccanismi di malattia.

Siglec-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SIGLEC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Siglec-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SIGLEC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SIGLEC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Siglec-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SIGLEC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Siglec-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Siglec-1 nelle cellule tumorali con espressione di SIGLEC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.