SFRS2B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401973-ACT

SRSF8 codifica per il fattore di splicing ricco in serina/arginina SFRS2B, una proteina legante l’RNA che partecipa all’assemblaggio dello spliceosoma e regola le decisioni di splicing alternativo del pre-mRNA. Attraverso il riconoscimento di enhancer di splicing esonici e il coordinamento dell’inclusione o dello skipping degli esoni, SFRS2B influenza la diversità delle isoforme di mRNA, la stabilità dei trascritti e la composizione del proteoma a valle. L’attività dei fattori di splicing si interseca con l’allungamento trascrizionale, la maturazione dell’mRNA e il metabolismo dell’RNA in risposta allo stress, plasmando programmi dello stato cellulare come proliferazione e differenziamento. Lo splicing alternativo deregolato e l’espressione alterata dei regolatori della famiglia SR sono caratteristiche ricorrenti nella biologia delle malattie umane, a supporto dell’analisi delle reti di isoforme dipendenti da SRSF8 in contesti oncogenici e neurobiologici.

SFRS2B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SRSF8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SFRS2B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SRSF8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SRSF8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SFRS2B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SRSF8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SFRS2B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SFRS2B nelle cellule tumorali con espressione di SRSF8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.