Set1B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431532

Panoramica

Setd1b codifica la metiltransferasi della lisina istonica Set1B, un componente centrale dei complessi di modificazione della cromatina di tipo COMPASS che catalizzano la metilazione di H3K4 in corrispondenza di promotori attivi ed elementi regolatori. Attraverso la modulazione degli stati H3K4me1/2/3, Set1B contribuisce a coordinare l’inizio della trascrizione, l’attività della RNA polimerasi II e il mantenimento epigenetico dei programmi di identità cellulare. La regolazione della cromatina dipendente da Setd1b è collegata a reti di espressione genica dello sviluppo e neuronali, e un’alterazione della funzione di SETD1B è associata a fenotipi neuroevolutivi e a una più ampia disregolazione epigenetica rilevante per la biologia delle malattie. Nei sistemi murini, Set1B rappresenta un bersaglio trattabile per analizzare come la metilazione istonica associata ai promotori plasmi la trascrizione responsiva ai segnali e i paesaggi della cromatina su scala genomica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Set1B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Setd1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Setd1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Setd1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Set1B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Setd1b per lo studio della segnalazione di Set1B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Setd1b critici per la funzione di Set1B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Setd1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Set1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Set1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Setd1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Set1B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Set1B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Setd1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Setd1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.