serum reponse factor /SRF Plasmide Double Nickase (h): sc-400470-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- serum reponse factor /SRF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il serum reponse factor /SRF Double Nickase Plasmid (h) e il serum reponse factor /SRF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SRF. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: serum reponse factor /SRF Antibody (A-11): sc-25290
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
serum reponse factor /SRF Plasmide Double Nickase (h) | sc-400470-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
serum reponse factor /SRF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400470-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’SRF umano (serum response factor) è un fattore di trascrizione della famiglia MADS-box che si lega agli elementi di risposta al siero per regolare l’espressione dei geni immediate-early e i programmi del citoscheletro di actina. Agisce a valle della segnalazione MAPK/ERK e della dinamica RhoA–actina tramite cofattori come ELK1 e i fattori di trascrizione correlati alla myocardina, coordinando proliferazione, migrazione e differenziamento. La trascrizione dipendente da SRF contribuisce a mantenere l’omeostasi del citoscheletro e le transizioni di stato cellulare, collegandola a processi quali miogenesi, neurosviluppo e rimodellamento vascolare. Un’attività di SRF disregolata è stata associata all’invasività delle cellule tumorali e ad alterazioni delle reti trascrizionali sensibili allo stress, rilevanti per la biologia del cancro e per i meccanismi delle malattie cardiovascolari.
serum reponse factor /SRF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SRF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SRF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SRF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SRF interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.