Serglycin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404207-ACT

SRGN codifica per la serglicina, un proteoglicano secreto e residente nei granuli che porta catene di solfato di condroitina e funge da impalcatura per mediatori cationici quali proteasi, chemochine e fattori di crescita. Nelle cellule immunitarie ed ematopoietiche, la serglicina sostiene la biogenesi regolata dei granuli secretori, la ritenzione del carico e l’esocitosi dipendente dallo stimolo, modellando la segnalazione infiammatoria, il rimodellamento della matrice extracellulare e la comunicazione cellula–cellula. La sua attività interseca vie associate alla degranulazione in mastociti, linfociti citotossici e linee mieloidi, influenzando reti di segnalazione guidate da proteasi e la disponibilità di chemochine. Un’espressione deregolata di SRGN è stata associata a microambienti immunitari alterati e a interazioni tumore–stroma, rendendola rilevante per studi sui meccanismi di malattie legate all’infiammazione e sulla biologia del cancro.

Serglycin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SRGN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Serglycin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SRGN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SRGN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Serglycin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SRGN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Serglycin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Serglycin nelle cellule tumorali con espressione di SRGN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.