Septin 7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401655-ACT

Il gene umano **SEPT7** codifica la septina 7, un componente centrale dei filamenti di septine etero-oligomerici che funzionano da barriere di diffusione e da impalcature del citoscheletro. La septina 7 coordina l’organizzazione di actina e microtubuli per sostenere la citocinesi, la polarità cellulare, il rimodellamento di membrana e il traffico vescicolare, e contribuisce all’architettura del corpo intermedio (midbody) durante la divisione cellulare. Attraverso questi ruoli, **SEPT7** influenza processi legati a proliferazione e migrazione ed è spesso studiato nel contesto della disregolazione del citoscheletro osservata nella biologia del cancro e nei meccanismi di malattie neuroinfiammatorie o neurodegenerative. Le sue interazioni all’interno dei complessi di septine collegano inoltre **SEPT7** a vie di segnalazione che regolano la stabilità corticale, il controllo della forma cellulare e la compartimentalizzazione delle proteine di membrana.

Septin 7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SEPT7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Septin 7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SEPT7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SEPT7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Septin 7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SEPT7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Septin 7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Septin 7 nelle cellule tumorali con espressione di SEPT7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.